モノクローナル抗体の精製―応用例

カラム：

HiTrap™ Protein G HP 1 ml

サンプル：

ハイブリドーマ細胞培養上清

バッファーA：

20 mM リン酸ナトリウム、pH 7.0

バッファーB：

0.1 M グリシンー塩酸、pH 2.7

流速：

1.0 ml/min

カラム：

HiLoad™ 16/60 Superdex™ 200 pg

サンプル：

ヒトIgG（3.6mg）、BSA（2mg）、
トランスフェリン（0.75 mg）

サンプル量：

1 ml

バッファー：

20 mM リン酸ナトリウム、0.15 M NaCl、pH 7.0

流速：

0.5 ml/min（15 cm/h）

カラム：

SOURCE™ 15 PHE

サンプル：

モノクローナル抗体にウシ血清由来IgGを混合したもの

溶出液Ａ：

0.1 M リン酸バッファー、0.75 M 硫安、pH 7.0

溶出液Ｂ：

0.1 M リン酸バッファー、 pH 7.0

溶出：

0% B 10 CV、65% B 5CV

流速：

150 cm/h

カラム：

SP Sepharose™ Fast Flow

サンプル：

ハイブリドーマ細胞培養上清

バッファーＡ：

0.075 M Tris-HCl、pH 8.0

バッファーＢ：

0.075 M Tris-HCl＋1 M NaCl、pH 8.0

流速：

30 cm/h

グラジエント：

0→30% B（10 カラム体積）

カラム：

Superdex™ 200 10/300 GL

サンプル：

陽イオン交換クロマトグラフィーを用いて粗分画した

IgM 0.2 ml（タンパク質量として0.1 mg）

バッファー：

0.05 M リン酸ナトリウム、0.15 M NaCl、pH 7.8

流速：

1 ml/min