ペプチドの精製--応用例

応用例1：ポリマーベース逆相クロマトグラフィー（SOURCE™ 5RPC）を利用したペプチドマッピング

カラム ：SOURCE™ 5RPC ST 4.6/150 サンプル ：RVP-BSA-mT、およそ 750 pmol 溶出液Ａ ：0.065% TFA、pH 2 溶出液Ｂ ：0.05% TFA＋アセトニトリル、pH 2 グラジエント ：0～40% B / 115 ml（46 CV） 流　速 ：0.5 ml/min 検　出 ：214 nm システム ：ÄKTA™purifier

応用例2：アルカリ条件下での逆相クロマトグラフィー

カラム ：SOURCE™ 5RPC ST 4.6/150 サンプル ：1.（lle)7Angiotensin III（pl 9.5） サンプル量 　2. Angiotensin III（pl 9.4） 溶出液 　3. β-Endorphin（pl 10.43） ：10 μl （0.5 mg/ml） ：pH 7.0　A　10 mMリン酸カリウム、pH 7.0 　　　　　 B　10 mMリン酸カリウム、 　　　　　　　pH 7.0 / 50%アセトニトリル 　pH 11.0 A　10 mMリン酸カリウム、pH 11.0 　　　　　 B　10 mMリン酸カリウム、 　　　　　　　pH 11.0 / 50%アセトニトリル 流　速 ：1 ml/min グラジエント ：10～100% B 検　出 ：214 nm システム ：ÄKTA™explorer 10XT

応用例3：イオン交換クロマトグラフィーとポリマーベース逆相クロマトグラフィーを組合わせた酸に不溶性のペプチドの精製例

サンプル ：pY574α, 100 μg カラム ：Mono Q™ HR 5/5 溶出液Ａ ：5 mMリン酸ナトリウム、 　30%アセトニトリル、pH 7.0 溶出液Ｂ ：溶出液Ａ＋1 M NaCl、pH 7.0 流　速 ：1 ml/min グラジエント ：0→75%B, 40 CV 検　出 ：230 nm, 268 nm, 278 nm	サンプル ：a）で得られたフラクション7, 100 μg カラム ：RESOURCE™ RPC 3 ml 溶出液Ａ ：0.1 M炭酸水素アンモニウム、pH 8.9 溶出液Ｂ ：60%アセトニトリル溶液 流　速 ：1.3 ml/min グラジエント ：5%B, 1 CV 　10→40%B, 60 CV 　85%B, 2 CV 検　出 ：230 nm, 268 nm, 278 nm

応用例4：ゲルろ過クロマトグラフィーによるペプチドの分画

ピーク1. cytochrome c 12,400 Da ピーク2. aprotinin 6,500 Da ピーク3. gastrin I 2,126 Da ピーク4. substance P 1,348 Da ピーク5. (Giy)6 360 Da ピーク6. (Gly)3 189 Da ピーク7. Gly 75 Da

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