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ImageQuant™ LAS 4000シリーズ活用法 その2 : 落射青色光源についてはじめにImageQuant™ LASシリーズのオプションのうち、励起波長460 nm青色の落射光源についてご紹介いたします。メンブレンだけでなく、蛍光色素で染色されたゲルの検出にも使用できます。 落射青色光源(460 nm)Epi-B Set、Epi-BGR Set●対応機種: 落射青色光源で検出が可能な蛍光色素には次のようなものがあります。
460 nmの青色励起光で励起でき、標準装備の蛍光フィルターで検出可能な蛍光色素には、上にあげたようにさまざまなものがあります。
もうひとつの510DF10フィルターはGFP用バンドパスフィルターで、中心波長510 nm±5 nmの光を透過します。GFPを検出する場合には、よりバックグラウンドの低い検出が要求されるため、励起光とともに515 nmより長波長領域をカットして検出します(図2)。
お使いになる色素の蛍光波長がY515、510DF10のいずれのフィルターでもできる場合は、次のように使い分けます。単色を検出する場合には、Y515フィルターを用いた方が、より感度高く検出することができます。これに対して、FITC(励起・蛍光波長表記)とTexas Red™(励起・蛍光波長表記)などの二重標識されたメンブレンなどを検出する場合には、色素間のクロストーク(波長重複)を防止するために、バンドパスフィルターである510DF10を使用します。この場合、FITCの蛍光ピーク付近の蛍光のみを透過し、それ以外のTexasRedの蛍光はカットして検出します。 3色(青、赤、緑)対応の光源(Epi BGR Set)であれば、光源を取り替えることなく、マルチカラー蛍光の検出が可能です。1色のみの光源(Epi B Setなど)を組み合わせてマルチカラー検出する場合には、光源を付け替えて検出します(図3)*。蛍光検出の場合には、ゲル・メンブレンを置くトレイは、化学発光と同じEPIトレイを使用します(図 4)。 * 蛍光マルチカラー検出は、ImageQuant™ LAS 4010/4000で行えます。ImageQuant™ LAS 4000 miniは、青色落射光源による1色の検出のみに対応し、マルチカラー検出には対応していません。
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