どっちを固定化する？シリーズ ②
抗体IgG vs 抗原タンパク質

質問

抗体IgGと抗原タンパク質の相互作用をBiacore™で測定したいと思います。
どちらの分子をセンサーチップに固定化しますか？

考え方のポイント

抗体IgGには、抗原結合部位が何ヶ所あるでしょうか？

答え

抗体IgGをリガンドとしてセンサーチップに固定化します。

解説

抗体IgGと抗原タンパク質の相互作用を測定する場合、抗体IgGをリガンドとしてセンサーチップに固定化し、抗原タンパク質をアナライトとして添加することが一般的です。

その理由は、Biacore™の測定では出来る限りAvidityという状況を避け、Affinity（リガンド対アナライトが1:1結合）の状況下で測定をした方が、より正確なk_a, k_d, K_Dを算出できるからです。

では、Biacore™の測定において、なぜAvidityを避けるべきなのでしょうか？

Avidityとは、アナライト分子にリガンドと結合する部位が複数あるため、反応の場で2種類以上のアナライトーリガンド相互作用が混在する状況のことです。例えば、抗原をリガンドとして固定し、抗体IgGをアナライトとして相互作用を測定した場合（上右図）、抗体IgGの1分子には抗原結合部位が2ヶ所ありますので、センサーチップ表面近傍では、アナライト（抗体IgG）：リガンド（抗原）が、1:1または1:2の形で混在することになります。そのため、アナライトがリガンドから完全に遊離するには、複数の相互作用を解離させる必要があります。Biacore™ では結合および解離の様子をリアルタイムで測定し、センサーグラムという形で表します。Avidityが生じるとセンサーグラムは複数の相互作用の現象を反映した複雑な形状となるため、正確なk_a, k_d, K_Dを算出することが難しくなります。そのため、Biacore™ の測定では出来る限りAvidityでの実験系を避け、リガンド対アナライトが1:1結合のAffinityの実験系を組むことをお勧めしています。