ノウハウや経験がなくてもBiacore™の測定系を最速で立ち上げられる方法でご紹介したBiotin Capture kitを使用した実験を行う手順をご案内します。

どのようなものが必要になりますか？

実験に必要になるのは、Biotin CAPture Kitとビオチン化したリガンド、アナライトだけとシンプルです。 Biotin CAPture kitには実験に必要なセンサーチップとBiotin CAPture reagent、再生溶液などが含まれています。機種にもよりますが80～140回分ぐらいの試薬が含まれています。

Biotin CAPture Kitのワークフロー

大まかな流れを図示しました。まずリガンドをビオチン化し、センサーチップへ固定化、Biacore™での測定/解析という3ステップで行えます。センサーチップは再利用が可能なので、Sensor Chipの保存というステップも加えています。

続きまして、各ステップを少し詳しく見ていきます。

リガンドのビオチン化

EZ-Link、Avi-Tagなど目的分子にあわせてビオチン化する市販のキットを選択し、リガンドをビオチン化します。サンプル中にフリーのビオチンがあると、固定化時にビオチン-ストレプトアビジンの反応を阻害します。なので、ビオチン化したリガンドをNAP™-5カラムあるいはMicroSpin™ G-25 columnsで精製し、フリーのビオチンを取り除きます。

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Sensor Chipの水和処理

特にSensor Chip CAPを使用する初回、または、乾燥状態で保管された場合、水和処理を行います。通常、使用する前日にSensor Chip CAPをシステムにドックして、超純水やランニングバッファーをStandby flowにしておきます。

測定/解析

キットに付属のSensor Chip CAPをBiacore™にセッティングし、Biotin CAPture Reagentを流したのち、ビオチン化したリガンド、ランニングバッファーで希釈したアナライト、再生溶液の順にインジェクションされます。

リガンドおよびアナライトの、流速やコンタクトタイムなどはアプリケーションによって変わるので、適宜調整してください。

Sensor Chipの保存

Biotin CAPture Kit付属のSensor Chip CAP は、Standby flow のままシステム内で保管、または50 ml 遠沈管などでHBS bufferに浸した状態で保管します。4～8℃で2か月間の保存ができます。

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