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2020年5月13日、Oliver Hardickによる「Rapid cycling protein A based fiber chromatography to address emerging downstream bottlenecks」Webinarを開催しました。ここでは、Webinar中に寄せられた質問を取り上げ、回答しています。（2020年5月時点の内容です。）

Fibro chromatographyの製品/プロセス関連不純物のプロファイルは、プロテインAレジンのそれと同様ですか？

はい、MabSelect PrismA™ ResinとFibro PrismAの純度データは非常によく似ています。私たちは、50種類以上の工業用mAbで、HCPの削減、DNAの除去、プロテインAのリーク、凝集体の形成を分析し、このことを実証しました。また、MabSelect PrismA™とFibro PrismAを使用した後の異なるフィードからの残留HCPを分析する作業も実施しており、強力なアライメントを示しています。これは、アフィニティークロマトグラフィーにおけるリガンドの重要性を示しています。

スクリーニングを目的とした96ウェルフィルタープレートデバイスでFibroを発売する予定はありますか？

今のところありません。HiTrap Fibro™ PrismAは、ÄKTA pure™またはÄKTA™ avantとオートサンプラーとの組み合わせで、ロボットハンドリングシステムを必要としない超高速精製サイクルで、HTPDの仕事を見事にこなします。さらに、Fibroでは、ロボカラムやPreDictor™プレートでは得られないフルクロマトグラムが得られ、プロセスの理解を深めることができます。

CIPについて推奨されているものはありますか？そしてそれはどのような条件ですか？CIPステップは、サイクリング時間にかなりの時間を加えることになるのではないでしょうか？

CIPステップなしで200サイクルを達成したプロセスを見たことがありますが、推奨するのは、毎サイクル0.5または1MのNaOHで30秒または60秒の短いCIPステップを実行することです。これは、5～8分のサイクルタイム内で達成可能です。 CIPステップのフローを逆にして再平衡化することで、洗浄ステップの効率も向上します。

低力価（< 0.1g/L）での結合容量への影響はありますか？Fibroユニットに大量にロードしても、材料が洗い流されることはありませんか？

影響はありません。示されているDBCは通常同じで、0.01g/Lという低濃度のフィードでも実証されています。このことと高流速との組み合わせにより、Fibro chromatographyは低力価のフィードに適した選択肢となります。しかし、フィードの力価はユニットにロードされる量に影響を与えます。低力価のフィードの場合、1サイクルあたりのフィードの量が多くなるため、逆方向からの送液、低pH、1.0M NaOHへの長時間の暴露など、より厳密なCIPレジームを各サイクルで用いることをお勧めします。

低力価/高容量のアプリケーション例については、製品プレゼンテーションから共有できる情報がありますので、弊社営業担当者にお問い合わせください。製品詳細については、Webページでもご覧いただけます。

Fibro chromatography 技術は、溶出プールが大きいのですか？

溶出液のmAb濃度は、レジンベースのプロテインAキャプチャーの場合と同様に、mAbやプロセスによって異なります。大規模なGMP対応Fibroユニットでは、2〜3 MVの溶出量を目指しており、大規模なFibroユニットでは10 g/L以上の溶出mAb濃度を達成しています。小規模のFibroユニットでは、溶出プールの容量が大きくなり、HiScreen Fibro™ PrismAでは3〜4 MV、HiTrap Fibro™ PrismAでは6〜7 MVとなります。

レジンクロマトグラフィーには、HETPなどのカラム効率試験があり、カラムのインテグリティを確認することができます。Fibro PrismAにはそのような試験はありますか？

すべてのGMP対応Fibroユニットは、出荷前に完全性および効率性のテストを行い、すぐに使用できるようにサニタイズされた状態で出荷されます。また、ユーザーはブレークスルーテスト（HETPの代替）を行うことができ、その詳細はユニット購入時に提供されます。

バッファの消費量は、レジンベースのプロセスよりも大きくなるのでしょうか？

クロマトグラフィーステップでのバッファボリュームの消費量は、結合容量に大きく依存するため、どのレジンと比較するかによって異なります。1サイクルあたりのカラム容量/マトリックス容量の観点からは、Fibroのクロマトグラフィーは同等かそれ以上であると考えています。MabSelect PrismA™のような最近の高容量レジンは結合容量が大きいため、バッファの消費量も若干少なくなっています。Fibroでのバッファ使用量は、既存のバッファ製造のための設備インフラと比べても遜色ありません。私たちはバッファの消費量を0.5～0.6L/g程度にすることを目標としており、これまでの共同研究でも達成されています。

Fibro PrismAユニットのウイルスクリアランスについてのデータはありますか？

ウイルスクリアランスはMabSelect PrismA™と非常によく似たデータが得られています。この結果は、GMP対応のFibro PrismAの大規模なユニットリリースに向けて発表される予定です。これは、このステップにおけるリガンドの重要性を示すものです。PrismAのリガンドは、この製品のキャプチャー性能において、製品ストリームに最も大きな影響を与えるものです。

1日にFibroを使って200サイクル行うプロセススケールにおいて低pHのウイルス不活性化処理をどのように捉えていますか？

Fibro後の低pHのウイルス不活性化プロセスは、ユーザーの好みに応じて様々な方法で取り組むことができます。多くのユーザーは、200の溶出画分を1つのタンクに集めた1つのロットとして処理しますが、これはプロセス時間が現在のレジンカラムのオペレーションに沿っているためです。また、50個のフラクションを組み合わせた小さなサブロットに分割し、VI後にプールするか、個々のサブロットとして処理を継続するユーザーもいます。また、連続プロセスを採用しているユーザーの中には、連続的な低pH VIを検討している人もいます。

製造スケールのプロセスでFibroがどのように使用されるか説明してもらえますか？レジンベースのクロマトグラフィーと比較して、どのような利点がありますか？

製造スケールにおけるFibroの主な利点は、その柔軟性です。大規模なスケールでは、レジンベースのクロマトグラフィーと比較して、高速精製サイクルを利用してプロテインAのステップの処理時間を短縮することができます。これにより、他の工程に時間を割くことができます。また、ユニットの全寿命（約200サイクル）を1つのアップストリームバッチに使用することで、消耗品の量とコストを削減することができます。これにより、コスト効率の高いシングルバッチクロマトグラフィーが可能となり、臨床製造においてはレジンベースのクロマトグラフィーと比較して大幅にコストを削減することができます。また、商業生産においては、シングルユースのオペレーションにより、キャンペーン間の長い切り替え時間を短縮することができ、洗浄バリデーションも不要となるため、多品種生産設備にとって魅力的なフォーマットとなります。

サンプルの前処理はFibroユニットの寿命に影響を与えますか？

サイクル寿命は、Fibroユニットに搭載されるmAbハーベストの特性と容量に直接関係します。2-5g/Lの力価の清澄化されたフィードで、200サイクルのライフタイムの例が複数観察されています。一般的には、レジンの場合と同様のサンプル調製手順をFibroユニットにも適用できます。採取したmAbは、遠心分離とろ過で清澄化することをお勧めします。難易度の高いフィードや低力価のフィードの場合、プロセスに関連する不純物を効率的に除去するために、DEPTHフィルトレーションを使用することができます。DNA/HCPやクロマチンを含む荷電粒子を除去する工程（荷電DEPTHフィルター、珪藻土フィルターエイド、選択的沈殿など）を追加することで、難易度の高いフィードでもFibroユニットの寿命が大幅に伸びることが分かっています。

Fibro PrismAを使用するにあたり、ハードウェアに何か特別な要求がありますか？

第1世代のFibro PrismAでは、既存のハードウェアとの互換性が開発の中心となっています。Fibro PrismAは、レジンクロマトグラフィーと同じバッファーコンポーネントと容量、クロマトグラフィーシステム、インフラ、リガンドを使用しており、既存のバイオ製造施設との適合性を確保しています。今後発売される大型のFibro PrismAユニットは、ÄKTA ready™のシングルユース・フローパスシステムと連動するように設計されています。

PCCモードでFibroユニットを使用することはできますか？

ほとんどの場合、この方法でFibroを運用するメリットはありません。Fibroは、従来のシングルカラムのセットアップで得られる生産性の利点をすべて備えています。精製サイクルが速いので、1回のバッチで全ライフタイム（約200サイクル）を使用することができ、精製ユニットのフットプリントも最小限に抑えることができます。生産性は、1時間あたりの吸着剤1リットルあたりのmAb精製量（g/L/h）で表されます。マルチカラムのセットアップでは、グラムとリットルの両方を掛け合わせるので、影響は最小限に抑えられます。

なお、非常に低い力価のフィード（0.5g/L）の場合、サンプルロード時間が長く、サンプルロード中に残りのサイクルを完了させることができるマルチカラムレジンクロマトグラフィーよりも、Fibroのアプローチの方が有利な場合があります。

Cytivaは、ファイバーベースのサービスをどのように拡大していく予定ですか？

2021年には、Fibro PrismAのポートフォリオが拡大し、mAbの臨床および商業規模の製造をサポートする予定です。Fibroの技術プラットフォームは、mAbの捕捉以外にも幅広いアプリケーションに適用可能です。レジンに利用可能なすべてのリガンドは、Fibroユニットにも取り付けることができます。バインド／溶出操作での利点は明らかですが、Fibroはグラジエント溶出による近縁種の分離でも興味深い可能性を示しています。将来的には、さまざまなオプションが利用できるようになると思われます。

ベースとなるマトリックスの多孔性により、Fibro技術はAAVやレンチウイルスのようなワクチンや細胞・遺伝子治療用のウイルスベクターの精製に使用できる可能性を秘めています。Fibroのプラットフォームには、ベシクル、プラスミド、mRNAのような他の大型物質用の製品も計画されています。

もし、Fibroの効果が期待できる別のリガンドを必要とする特定の商業的処理の課題がある場合は、弊社営業担当者にご相談ください。