DIGE 道場　第3回
できるプロのタンパク質抽出術

第3回　もくじ

1. はじめに　～とってもDIGE（大事）なタンパク質抽出～
2. タンパク質可溶化液について　
3. 培養細胞からのタンパク質抽出法
4. 組織からのタンパク質抽出法
   • A. レーザーマイクロダイセクション法による試料調製
     1. 凍結切片の作製（本ページ）
     2. 確認のための凍結切片の染色（HE染色）
     3. 2D-DIGE法サンプル調製用の凍結切片の染色
     4. レーザーマイクロダイセクションによる切片切断
   • B. 凍結状態の試料からの試料調製
5. おわりに

Dr. 近藤のコラム
コラム第3回　「生涯道場編」 ～戦うプロテオーム研究～

レーザーマイクロダイセクション法 プロトコール
1.　凍結切片の作製

凍結切片の作成にはクリオスタットを使用する。クリオスタットの使用法は購入先のメーカーの担当の人に習っていただきたい。クリオスタットがすでに周りにあるということは、誰か使える人がいるはずなのでその人に教わってもいいだろう。学生でも1時間も教えてもらえば誰でもマスターできる。腫瘍組織によっては難しい検体もあるのだがそれは例外的であり、ほとんどの場合、すぐにできるようになる。難しいものについては「習うより慣れろ」式に皆マスターしているようだ。クリオスタットがついに使えるようにならなかったという人はかつていないと思うので心配しなくてもよい。

凍結切片の作製自体は2D-DIGE法だからといって何も特別なことはない。厚さが8～10 µmであることが若干普通と違うところだろうか。レーザーマイクロダイセクションの機種によっては専用のスライドグラスを使用する必要がある。そうだとしても難易度が上がるわけではない。

次へ　確認のための凍結切片の染色（HE染色）

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