DIGE 道場　第3回
できるプロのタンパク質抽出術

図7　モニターでこれから切る部分の輪郭決めをしたところ

これからレーザーを照射する。あらかじめ、面積にして1 ｍｍ平方分を囲っておくと残りは全自動で機械が行う。１サンプルにつき3枚のゲルを２D-DIGE法にかけること、内部標準用にもタンパク質サンプルが必要なこと、などから合計では６ ｍｍ平方の面積の腫瘍細胞を回収している。撮影協力；諸藤教彰医師（左）、植村則久医師（右）。

図8　切断時の切片画面

レーザーが輪郭をなぞるように切っている。

光って見えるところがレーザーが当たっているところ。

図9　モニターでこれから切る部分の輪郭決めをしたところ

切片から必要な数の細胞を回収し終えた。見えにくくて申し訳ないが、抜けているところが分かるだろうか？この専用スライドグラスはニップンテクノクラスタ社を通じてMMI社から市販されている。

図10　切断した細胞の回収

MMI社の機械の場合、このようにエッペンドルフチューブのふたのところにシリコンを満たしておき、そこにレーザーマイクロダイセクションで回収した細胞をひっつけて回収する。

青みがかった切片がわずかに付着しているのが見えるだろうか？この専用チューブは2種類のサイズがニップンテクノクラスタ社を通じてMMI社から市販されている。

図11　食道がん腫瘍組織からレーザーマイクロダイセクションで細胞を回収したときの二次元電気泳動画像

特にチャンピオンデータというわけではなく、これくらいの画像がルーチンに得られる。施行者は食道がん外科を専門とする植村則久医師。レーザーマイクロダイセクションと蛍光二次元電気泳動法を使って500枚ほどのゲルを泳動し、手術後の予後を予測できるバイオマーカーを開発している。今年になってついに候補となるタンパク質を同定し、免疫染色で検証実験に成功した。臨床検体を用いた食道がんのプロテオーム解析としてはもっとも本格的なものである。

図12　悪性胸膜中皮腫の腫瘍組織からレーザーマイクロダイセクションで細胞を回収して得られた二次元電気泳動画像

施行者は寶迫睦美研究員。彼女もプロテオーム解析はまったくの初心者だがすぐに手技をマスターしどんどんデータを出している。悪性胸膜中皮腫と他の悪性腫瘍との鑑別診断が臨床的に問題になることがあるので、鑑別診断に有用なバイオマーカーを開発している。悪性胸膜中皮腫の組織型を区別し、腫瘍細胞と他の細胞を区別して細胞を回収しなくては、特定の腫瘍細胞に特有のタンパク質を同定することはできないだろう。