東京大学大学院
医科学研究所
津本 浩平 先生

実践編-1：抗シガトキシン抗体の相互作用解析例（3）

目次

1. はじめに
2. 環状ポリエーテル化合物シガトキシン
3. 方法（当ページです）
4. 実験結果
   1. 抗シガトキシン抗体10C9FabのX線結晶構造解析
   2. 抗原抗体相互作用の熱力学的解析
5. まとめ

3. 方法

抗CTX3C抗体10C9は、マウスモノクローナル抗体IgGからパパイン消化によりFabを調製し、陽イオン交換クロマトグラフィー、サイズ排除クロマトグラフィーにて精製したものを各種解析に用いました。また、抗原はCTX3Cの断片構造となるABC環、ABCD環、ABCDE環の3種類の環状ポリエーテル化合物を用いました（Fig. 1）。

10C9FabのX線結晶構造解析は、10C9Fab単独、10C9Fab・CTX3C-ABCD複合体、および10C9Fab・CTX3C-ABCDE複合体の3種類について結晶化を行い、いずれも分子置換法にて構造を決定しました。RMSDの算出、温度因子（B-factor）の算出は、CCP4プログラムを用いました。

抗原抗体相互作用解析は、VP-ITCを用いた等温滴定型熱量測定およびVP-DSCを用いた示差走査型熱量測定により熱力学的解析を行いました。その他の条件はこの後示してゆきます。

次へ（実験結果-抗シガトキシン抗体10C9FabのX線結晶構造解析）

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