東京大学大学院
医科学研究所
津本 浩平 先生

実践編-2：相互作用解析手法を用いた低分子スクリーニング その1（3）

目次

1. はじめに：抗シガトキシン抗体
2. 低分子スクリーニングと熱量測定：序論
3. 実験方法（当ページです）
4. ITC測定による特異的相互作用を形成する化合物の同定
5. リガンドの構造的特徴
6. まとめ

3. 実験方法

低分子化合物ライブラリーは、ActiveSight社のACTIVESIGHT FRAGMENT LIBRARY（384化合物）を用いました。低分子化合物ライブラリー外で用いた試薬はVitamin A, Vitamin D3, Vitamin E, Vitamin K2, Estradiolです。いずれも市販の試薬をDMSOに溶解させ、その上で測定溶媒を用いて希釈、濃度調整を行いました。

測定装置は、滴定型カロリーメーターiTC200を使用しました。溶媒は、5% DMSO含有PBSを用い、30℃条件下、攪拌速度500 rpmにて測定を行いました。抗体は測定溶媒と同じ5% DMSO含有PBSにて限外ろ過による溶媒置換をした後、50 µMに濃縮した溶液をシリンジ側から1. 6 µLずつセルに滴下しました。セル側には10 µMの低分子化合物を充填させました。低分子化合物はストック溶液として200 mM DMSO溶液の状態で-20℃条件下で保存し、測定には5% DMSO含有PBSにて2万分の1希釈した溶液を用いました。

次へ（ITC測定による特異的相互作用を形成する化合物の同定）

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